流式细胞术是基础研究以及药物发现和开发中细胞分析和基于细胞的测定的强大工具。 该技术的应用多种多样，从简单的细胞计数和活力测定，到复杂的细胞内染色。 但正是分析大量转录后v变化的能力，使得流式细胞术成为现代细胞生物学实验室不可或缺的一部分。 尽管流式细胞术首次出现于 20 世纪 60 年代，并且此后取得了无数的进步，但它仍然被誉为一项困难的技术，需要具有深入知识的专业专家才能成功执行。 iQue ® 先进的流式细胞术平台的开发旨在克服这一问题，使这种强大的技术重新回到每个实验室的能力范围内。
本案例研究满足现代药物发现和开发工作流程的需求，探索实验设计的以下四个关键支柱，以展示加速基于细胞的检测工作流程的综合解决方案将带来的好处。
1. 重现性 2. 可靠性 3. 优化样品使用 4. 多重分析
iQue ® 3 是一种先进的高通量流式细胞术解决方案，旨在加快整个工作流程。 iQue ® 平台提供了一种新颖的筛选解决方案，简化了从实验设置和采集到分析和结果的过程。
专为药物发现和开发而设计，得益于一系列标准化方案和试剂，它需要最少的分析优化，并且系统的专用 iQue Forecyt ® 软件可实时生成 IC50/EC50 曲线、热图和图表分析等数据时间。 快速、准确的数据生成对于项目进展至关重要，因此 iQue ® 旨在通过使用更少材料的更少实验提供更深入的生物学见解。 它可以同时测量细胞特异性参数（例如表型变化和增殖率），并在单次测定中量化分泌因子，每孔体积低至 5 µL。
重现性 iQue ® 经过精心设计，可在重复过程中生成可靠的数据，显示测定板之间良好的日内和日间相关性（图 1A 和 1B）。 含有已知量试剂的孔用于测试不同板重复和测试天数的再现性。 将四种小鼠抗体同种型 IgG1、IgG2a、IgG2b 和 IgG3 以多种浓度混合，并在 24 个重复孔中进行测量。
使用 iQue ® 小鼠 IgG 类型和滴度测定试剂盒 在同一天运行三个板（图 1A）或在不同的日子测量单个板（图 1B） 。 对所有样品的变异性进行了分析，相关性 R2 > 0.99，线性回归曲线值约为 1，显示出日内和日间测试的出色测定重现性。
优化样品使用 iQue® 的顺序采样和小型化功能允许随着时间的推移从单个孔中评估多个参数，从而节省宝贵的样品和试剂，并减少实验变异性。 为了证明这一点，iQue ® 多重人抗体内化试剂盒（一种抗体内化测定）运行 20 小时，重复评估多个参数，包括细胞活力。 Ramos 细胞以 1×106 个细胞/mL 的密度接种在含有两倍连续稀释抗体的 384 孔板中（从 1 mg/mL 开始），并在不同时间点对每个孔进行连续测量。 热图（图 4A）和图表（图 4B）提供了每个采样时间点抗体内化程度的数据分析，证明了评估多个时间点以检测内化速率较慢的抗体的重要性，如 CD20 所示。 使用 iQue ®重复采样 也非常适合跟踪随时间变化的动态生物变化，例如细胞激活后细胞因子分泌的量化。
可靠性 iQue ® 能够为用户提供跨不同仪器或操作员的一致数据，在使用固定光电倍增管 (PMT) 电压的运行之间提供可靠的操作和显着的一致性。
多重分析 药物发现实验室的需求不断增长的最后一个支柱是 iQue ® 执行多参数测量以生成更多生物学相关数据的能力。 凭借经过验证的、即用型多重检测试剂盒，iQue ® 非常适合处理多个板并提供多个读数，无需清洗 | 单次洗涤测定和新颖的数据缩减工具可提供准确且精确的结果，同时缓解实验室工作流程中的瓶颈。 iQue ® 可以同时测量细胞表型、增殖和凋亡的变化，并结合分泌蛋白的释放（例如细胞因子），为高内涵分析带来新的意义。